斯丹姆洞见 center
细胞免疫应答是机体维持稳态的重要组成部分。天然免疫选择性激活适应性免疫后，细胞免疫发挥杀伤清除功能。因此，对细胞免疫应答水平的评估在癌症诊断与治疗、传染性疾病诊断与预防以及疫苗免疫效果评价等方面意义重大。分析感染期间、给药后或疫苗接种后的细胞免疫反应是重要的生物样本分析检测指标。目前，对细胞免疫功能的检测主要以细胞表型、细胞增殖、细胞杀伤作用和细胞因子释放能力为主，分离后的外周血单个核细胞（PBMC）成了细胞免疫最常用的样本。
本期和大家分享PBMC的分离和保存中应注意考量的参数，期待能对大家优化实验样本质量有所帮助！
PBMC分离：关键步骤与注意事项
PBMC制备管
分离注意事项：
无菌操作：全程在生物安全柜中进行，避免污染。
温度控制：离心及操作应在室温（18-25°C）进行，低温可能影响分离效率。
样本新鲜度：新鲜血液分离效果最佳，陈旧样本可能导致细胞活性下降。
离心技巧：关闭离心机制动，以维持分层清晰。
PBMC冻存与解冻的标准化流程
在免疫学测定中，使用新鲜细胞无疑是最佳选择，然而在实际操作中可行性不高，为了方便操作，多数采用冷冻的外周血单核细胞（PBMC）。
冷冻与复苏过程会对细胞的活力和功能产生影响，这是无法回避的问题。所以，一旦使用冷冻细胞，就必须依据每项研究的具体条件，对细胞处理流程进行优化与标准化。只有制定出在不同采样和实验条件情况下均具备高重现性的方案，才能确保实验结果的可靠性和有效性，为后续研究奠定坚实基础。
这里列举了主要的冻存影响因素，包括冻存液、冻存条件和解冻过程。
冻存关键因素：
1、冻存液选择：传统的DMSO+FBS冻存液存在异源物质风险，推荐使用无血清培养基。研究表明，无异种成分的冻存液对PBMC的活力和功能没有显著影响。
2、冷冻速率：最佳冷冻速率为-1℃/min，可通过程序降温仪或Coolcell等无酒精降温盒实现。
3、储存温度：液氮是PBMC的最佳储存环境，避免-80℃下液态水对细胞的损伤。
解冻技巧：
Coolcell 细胞降温盒
冻存时间对PBMC功能的影响
尽管长时间冻存对PBMC细胞活力影响较小，但细胞功能可能随冻存时间延长而下降。也有最新研究表明，PBMC在冻存20年后仍能保持细胞功能稳定，这可能与冻存液配方等微小变量有关，进一步强调了标准化操作的重要性。
PBMC的分离与保存是细胞免疫研究中的关键步骤。通过优化分离技术、标准化冻存与解冻流程，您可以显著提升样本质量，确保实验结果的可靠性与重现性。无论是选择CPT管进行高效分离，还是使用无血清冻存液和液氮储存，每一步的精细操作都将为您的免疫研究保驾护航。
北京首研实验室专注于为预防疫苗、小分子药物及创新中药等领域提供专业、高效的生物分析服务。通过优化PBMC分离技术、标准化冻存与解冻流程，冻存复苏后的细胞活力可维持在95%左右，显著提升样本质量，确保实验结果的可靠性与重现性。无论是采用CPT管高效分离，还是使用无血清冻存液和液氮储存，每一步精细操作为免疫研究提供坚实保障。
同时，斯丹姆旗下实验室（北京首研和杭州安渡）在细胞免疫分析领域拥有先进的设备和技术平台，其流式细胞术、ELISpot检测平台能够实现从细胞表型、功能到细胞因子表达的全面分析，为免疫疗法和疫苗研发提供关键数据支持。此外，实验室还提供高度定制化服务，涵盖方法设计开发到数据分析的全流程，致力于为客户提供高质量、专业高效的生物分析解决方案。
参考文献：
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更新后的指南草案涉重点关注临床试验设计、监管考虑，以及这些试验是否能够证明药物能够维持根据BMI确定的减肥效果。
在前面三期的临床数据管理“PM”养成系分享内容中我们介绍了三个主题内容：明确临床试验各方职责范围划分的项目范围管理；运用公司及个人资源以完成数据管理工作的项目资源管理；如何通过制定时间线计划和进度跟进以完成项目重要里程碑事件的项目进度管理。这期我们分享的是兼顾项目管理与项目可交付成果两个方面的项目质量管理。
我们一起来回顾下前两次分享的临床数据管理“PM”养成系列的内容：首先是明确临床试验各方职责范围划分的项目范围管理，然后是运用公司及个人资源以完成数据管理工作的项目资源管理。这一期我们会针对项目管理的重头戏—项目进度管理来展开数据管理活动时间线计划和进度跟进的内容分享，在保证数据质量的前提下高效完成数据管理相关工作以达成项目重要里程碑事件。
在上一期的分享中，我们一起学习了数据管理工作相关的项目范围管理，分别识别了数据清理和数据管理活动的各方职责范围划分。在确定数据管理工作范围后，这一期我们一起学习如何调动工作范围内的相关资源，来更高效、更高质量地展开数据管理相关工作。
上海斯丹姆疫苗数据管理部联合国际项目部共同开展《项目管理知识在数据管理工作中的应用》主题系列培训。《项目管理知识在数据管理工作中的应用》包含项目整合管理、项目范围管理、项目进度管理、项目质量管理、项目资源管理、项目沟通管理、项目风险管理、项目相关方管理等八个模块内容，主要参考项目管理知识体系指南（PMBOK指南）的理论知识，并结合数据管理工作内容和项目实践经验进行展开。
